BRAF遺伝子変異検査

　犬の移行上皮癌や前立腺癌は侵襲性が強く転移性も高い悪性腫瘍です。発見時の進行度合いに応じて治療法が選択されますが、頻尿血尿などの明らかな症状が出てからご家族が気付くため発見が遅れることがあります。診断においては病変の超音波による描出、そして疑われる病変から採材した細胞組織の形態評価が行われています。しかし、検体の採材量不足や尿による変性で正確な診断が得られず形態だけでは確定診断に至らないことがあります。そこで弊社では診断をより確定的にするための補助となるBRAF 遺伝子変異検査を受託しています。本検査は侵襲性の低い採材法による検体で検査可能で、感度と特異度が高く、腫瘍と確定したい場合には形態評価との組み合わせで有用性を示します。

犬のBRAF 遺伝子変異

　犬の移行上皮癌および前立腺癌においてはBRAF 遺伝子（V595E）変異が高頻度で起こることが報告されました。この変異は移行上皮癌および前立腺癌以外にもいくつかの腫瘍において低頻度で起こっていることが同時に報告されています。しかし、移行上皮癌及び前立腺癌では60-80%の高頻度で変異が起こっていることから、診断的マーカーとして利用されています。（表1）

検査方法

　PCR-RFLP(Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism）
　PCR 法によりBRAF 遺伝子を増幅します。次に野生型のBRAF の遺伝子配列を切断する制限酵素を用いてPCR 増幅産物を切断します。
本検査では変異がない場合には切断されますが、変異がある場合には切断されません。

結果の解釈

　移行上皮癌あるいは前立腺癌における変異率は60-80％です。一方、これらの癌のうちの20-40％、過形成あるいは炎症病変では変異は検出されません（図1 参照）。　これは腫瘍マーカーとして感度が高く、特異度が100％であり、理論上、BRAF 変異があるということは移行上皮癌あるいは前立腺であることを示しています。
　このことから、弊社では解析結果に応じて「変異あり」「検出されず」を主たる結果として報告しています。「変異あり」は、他の検査と合わせてより確定的な診断材料となる意義があります。しかし、この結果をもって癌の分類はできません。一方、「検出されず」は変異を持たないタイプも存在するため、移行上皮癌あるいは前立腺癌を否定する意味ではないことに注意が必要です。また、検体中の腫瘍細胞の割合が少ない場合には変異の有無の判断がつかない場合がありますので、ご注意ください。

以下のような場合のご利用をご検討ください。

• 超音波検査で膀胱壁の肥厚などが認められたが開腹は困難であるため、尿や尿道カテーテルで採取した細胞で腫瘍性変化であるのか否かを明らかにしたい。
  摘出された組織でなくとも、目的の腫瘍細胞が含まれている検体であれば尿や膀胱尿道洗浄液で検査可能です。
• 細胞診/ 病理診断で移行上皮癌/ 前立腺癌が疑われたが、確定診断が得られていない。確定診断の根拠が欲しい。
• 細胞診を行ったが形態を維持した細胞が少なく評価が困難であった。
  基本的には細胞数が十分であり形態評価で診断が得られれば本検査を利用する意義は低いと考えられます。しかし、形態評価の結果、検体量の不足や尿による変性で診断が困難な場合、細胞診であれば鏡顕後のスライド標本でも検査は可能ですので、形態評価後の本検査の利用は有用だと考えられます。
• 形態評価では癌は否定的であったが、症状との整合性がつかず癌を否定できない。
  検査後のスライド標本あるいは再採材検体を用いた本検査の利用が診断につながる可能性があります。